具體操作見下圖：

①將菌種管和待接種斜面試管握在左手中，試管底接觸掌心。斜面一面向上，并處于接近水平位置。

②先菌種和待接種斜面試管的棉塞旋轉一下，以便接種時易于拔出。右手以拿筆或拿毛筆的姿勢捏住接種環金屬柄，將要伸入試管部分的金屬柄和金屬絲在酒精燈火焰外焰上灼燒滅菌。

③用右手小指、無名指和手掌下沿將兩管的棉塞同時夾住并拔出，棉塞不得接觸任何物品，更不得放在桌面上。

④再將兩個試管口在火焰上灼燒。將灼燒過的接種環伸入接種管內。使接種環在試管內壁上冷卻，然后用接種環在菌苔上刮取少許后抽出，抽出時勿與試管壁相碰，也不要通過火焰。

⑤迅速將粘有菌種的接種環伸入待接種斜面試管內，自斜面底部向上往復“之”字劃線，注意不要劃破瓊脂。

⑥劃線完畢后將接種環抽出，灼燒管口，塞上棉塞。塞棉塞時勿用試管口去迎棉塞，以免試管離開火焰周圍無菌環境時污染雜菌。檢查試管塞是否塞緊后將其放于試管架上。火焰灼燒接種環。

這里提到的斜面穿刺是指固體高斜面穿刺，如下圖。

固體高斜面穿刺示意圖

是把目標菌苔通過接種針接種到固體培養基內部和斜面上的一種接種方法。沙門氏穿刺接種三糖鐵斜面的操作就屬這種情況。穿刺固體培養基是為了觀察細菌在深層培養基中生長和代謝的情況。

操作時用筆直的接種針，從長有目標菌的培養基上挑取少量菌苔。將接種針平穩刺入培養基，勿觸到管底（距離試管底部大約2mm~3mm），也不可碰到試管內壁，然后沿原穿刺途徑慢慢抽出接種針，最后在斜面上進行“之”字劃線。

這里需要特別注意的是：斜面劃線和穿刺操作一定針對純培養物，否則實驗操作是無意義的。劃線或穿刺的目的是為了將純培養物二次傳代培養。這種操作也見于標準菌株復壯或傳代。整個操作過程中要嚴格規范操作，嚴格控制交叉污染。

針對細菌是否好氧，又可分為好氧菌固體培養基接種、厭氧菌固體培養基接種和微需氧菌固體培養接種。這可以用厭氧罐、厭氧盒或厭氧袋。搭配配套使用的厭氧劑和微需氧劑來實現合適的培養環境。對于要求特別嚴格或者菌體特別敏感的情況時，可以借助厭氧手套箱來進行操作（如下圖）。

厭氧手套箱是20世紀50年代末問世的專門用于研究專性厭氧菌的重要裝置，箱體結構非常嚴密，箱內既可以通過塑料手套進行實驗操作，又可進行恒溫培養。箱內一般充入85%的氮氣、5%的二氧化碳和10%的氫氣。同時將氧氣用催化劑去除，使箱內始終維持嚴格的無氧狀態。物品可以由有帶有密閉裝置的交換室進出箱體。